平滑肌細胞培養基是一個基于碳酸氫鹽的緩沖體系,可以在孵育的5%的CO?的氣體環境下維持一個圍繞pH7.2的酸堿緩沖體系。本體系是一個無菌的液體混合系統,其中包含必須和非必須氨基酸、維生素、激素、生長因子、微量元素和一些其他的有機和無機化合物以及胎牛血清(10%)。
平滑肌細胞培養基SMCM可用于平滑肌細胞增殖實驗:
以25cm2(50ml)一次性培養瓶培養細胞,細胞在經過消化傳代后明顯較原代胖大,細胞可自行沿一定方向生長,表現為峰谷樣圖案。平滑肌細胞隨著傳代次數增多,體積會逐漸增大,突觸明顯并逐漸喪失梭形結構,當細胞生長密集時,擁擠的細胞逐層環繞,中心可隆起呈結節狀。將酶消化法獲得的細胞傳代至第3代,分別以平滑肌細胞培養基SMCM或含10%新生牛血清的DMEM/F12培養基(10%-F12)進行培養,及時記錄細胞生長情況。以每孔2000個細胞為標準將第3代平滑肌細胞接種于96孔板內,每個樣本需重復3~4個輔助測量孔。將96孔板靜置于細胞培養箱內,6小時后觀察細胞貼壁、舒展。以每100μl培養基加10μlCCK-8試劑的比例配置混懸劑。清除各待測孔培養基后,每孔加入混懸劑100μl。將96孔板靜置于培養箱內2h后取出,置于微孔板振蕩器上震蕩1min,將96孔板轉至酶標儀,在450nm波長下讀取各孔數據并記錄。測量吸光值后的孔不再重復使用。每24h測量一次實驗孔吸光值,連續測量9天(216h)。觀察結果。
使用該培養基時應注意將基礎介質儲存在4℃,將SMCGS、FBS和P/S溶液儲存在-20℃。避光保存。